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你是否还在为 Western Blot 本质的肖似性问题感到困扰？是否在追求好意思满条带的进程中一再肖似本质却永远无法称愿？在考虑卵白质翻译后修饰时，你是否还在使用传统的平行考验才略？要是你渴慕取得精确且好意思满的条带，Li-Cor Odyssey 将为你提供科罚决议。
上图好意思满的Western Blot条带出于Nature Chemical Biology 上的著作：“Recruitment of FBXO22 for targeted degradation of NSD2”。本篇著作作家刻画了一种靶向卵白质降解（TPD）计谋，触及招募FBXO22指引组卵白甲基改动酶和致癌基因NSD2的降解。在佩带NSD2功能取得性突变p.E1099K的急性淋巴细胞白血病细胞中，UNC8732促进FBXO 22介导的NSD2降解，导致滋长遏抑、细胞凋一火和耐药性逆转。在文中RCH-ACV，U2OS， MCF7和293 T-REx细胞裂解物免疫思路均是使用近红外激光成像系统Li-Cor Odyssey CLx完成。
Odyssey CLx
部分后果展示
1 UNC8732靶向急性淋巴细胞白血病细胞NSD2突变体
UNC8732大致降解NSD2突变的急性淋巴细胞白血病细胞(ALL)中的NSD2。在NSD2 p.E1099K突变细胞中，相对于NSD2 WT细胞显现高水平的H3K36me2和低水平的转录遏抑H3K27me3，这种表不雅遗传模式在NSD2降解后得以逆转。除了指引细胞凋一火和裁减细胞活力外，UNC8732还大致灵验克服NSD2 p.E1099K突变ALL细胞对糖皮质激素（GC）诊治的耐药性，这一特质在复发性ALL的临床诊治中具有进攻兴味。
2 醛代谢物脱手NSD2降解
基于液相色谱-质谱(LC-MS)的代谢物大肆考虑一代降解剂UNC8153和第二代降解剂UNC8732均发现发现了一种代谢物，与伯胺回荡为醛相对应，况且发现FBS中的胺氧化酶认真这种回荡。作家合成并别离了水解不安然的醛的前药UNC9801和UNC10088，发现UNC10088与UNC8732不同，它不依赖于FBS的存在来促进NSD2的降解(图2j)，相应的UNC8153的酸类似物，它莫得促进NSD2的降解，放弃了醛进一步氧化在不雅察到的降解中起作用的可能性。这些后果阐明了含胺的NSD2降解物动作前药起作用，需要代谢成相应的醛能力发扬活性。
3 UNC8732召募SCFFBXO22泛素畅达酶复合物
之前照旧解说，UNC8153和UNC8732以卵白酶体和泛素化依赖的模式起作用。诓骗生物素象征识别技能(BioID)和质谱联用(MS/MS)在卵白质组鸿沟内寻找参与降解NSD2的候选泛素E3畅达酶，发现FBXO22、PSMB1、PSMB5和PSMA5均有所增多。后续使用NanoBRET卵白-卵白互相作用本质，解说UNC8732介导的FBXO22向NSD2的召募。
回来
近红外激光成像系统Li-Cor Odyssey DLx是Odyssey CLx的更新版，其选择的是近红外荧光成像。传统的化学发光是基于辣根过氧化物酶的旨趣，会受到底物浓度、温度、时分的影响，因此使用化学发光成像时，成像时分很进攻，而近红外荧光成像的信号是安然的，比拟于化学发光定量更准确。Li-Cor Odyssey DLx领有双激光器双检测器，特别是针对卵白翻译后修饰考虑时，可销毁张膜同期成像多个卵白，减少了平行胶和抗体剥离再孵育带来的操作差错，使Western Blot数据的定量更准确，肖似性更高。如文中H3K36me2和H3K36me3的甲基化水平考虑，更能发现渺小各异。
Li-Cor Odyssey DLx和CLx还领有更宽的动态鸿沟达6个数目级，能保证仪器检测到低信号时强信号不外曝，更符合药物浓度跨度较大的高通量考虑。如文中使用的In-Cell Western (ICW)测定的半数最大降解浓度(DC50)值和最大降解水平（Dmax）。
Odyssey®的丰富应用
LI-COR Biosciences公司的Odyssey® 红外激光成像系统不错收场定量Western Blot检测，具有肖似性好、定量准确、 多色荧光成像、布景低、智谋度高、可胜仗检测、应用鸿沟广等多种上风，其不仅不错进行孔板的In-Cell WesternTM检测，还不错收场近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、组织切片成像、On-Cell Western、EMSA/凝胶搬动本质、荧光卵白质芯片、荧光核酸芯片、考染胶成像、器官成像等多种应用。
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