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Seamless Assembly 是一种简短、快速、高效的 DNA 定向克隆时间，该时间摧毁传统，不依赖内切酶和结合酶，不受甩掉性内切酶酶切位点的甩掉，诈欺同源重组的旨趣，可将任何 DNA 片断克隆至任何载体的任何位点，响适时间+转化时间短至 20 min，阳性率达 95% 以上。响应旨趣试验门径1、线性化载体的制备可通过单酶切、双酶切或 PCR 扩增制备av网站有哪些，要是线性化不透顶，将会导致阴性克隆的产生，保举使用双酶切或 PCR 扩增的门径。2、DNA 片断的制备1） DNA 片断可通过 PCR 扩增或酶切的门径制备，PCR 扩增片断无需纯化即可用于重组响应。2）PCR 扩增法引物盘算原则：

引物的 3’端必须包含 18-50 个能与模板 DNA 结合的碱基序列，以便 PCR 扩增出指标 DNA 片断； 引物的 5’端必须包含 15-80 个与线性化载体结尾同源的碱基序列，以便 PCR 扩增片断能与线性化载体进行重组响应。

3、重组响应 1）按照如下体系操作：DNA 片断和线性化载体 0.5-5 uL2*Seamless Master Mix 5 uLddH2O x uL 总响应体积 10 uL2）50 ℃ 响应 15 min，然后将离心管甩掉于冰上。如本日不进行转化试验，请将集聚产品放 -20 ℃ 保存。4、转化

取 5 uL 结合液至 50 uL 刚刚溶解的 DH10B 感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴 2-30 min。 42 ℃ 水浴中热激 30 s。 立即甩掉于冰上静置 2 min。 加入 300-500 uL 无菌培养基（不含抗生素），37 ℃，200-250 rpm 回荡培养 60 min。 吸取 200 uL 菌液铺板。

５、武断阳性重组子1） 菌落 PCR 法挑取大小适中的克隆菌至 10 ul 无菌水中，充分夹杂，取 2 ul 夹杂液手脚 PCR 响应的模板，使用载体克隆位点两头的引物手脚武断重组子的扩增引物进行 PCR 扩增，响应充足后取 10 ul PCR 产品电泳武断. 阐发重组子后， 将剩下的 8 ul 夹杂液转接到培养基中（含抗生素），过夜摇菌，然后抽提质粒。2）甩掉性酶切法挑取大小中等的克隆菌至培养基中 (含抗生素)，过夜摇菌培养，然后抽提质粒。用载体上的甩掉性内切酶进行酶切武断。参考文件：题目：Neural Stem Cells Behave as a Functional Niche for the Maturation of Newborn Neurons through the Secretion of PTN题目：Identifification and genetic characterization of a novel parvovirus associated with serum hepatitis in horses in China公司先容：「中好意思泰和生物」 是好意思国原装入口 Clone Smarter 克隆试剂盒的国内独家代理。旗下两个系列：Clone Smarter 无缝克隆试剂盒Clone Smarter 零布景 TOPO 克隆试剂盒：Blunt / TA / Omni均在北京各大高校如中科院，中国农业大学，清华大学等捏续畅销。咱们是行业向上的靠近生物时间研发和生物制药建造的国外性就业贯串试验室。有近十年的业内训戒和极其专科的生物时间团队，现在照旧完成国表里客户数万条全基因的合成使命！咱们的就业业已触及到三十几个国度和地区。在国外竞标中咱们照旧得胜地从好意思国，英国，德国，加拿大，韩国，日本，澳大利亚等上千家个国度机构，院校，生物公司及制药公司贯串了条约。几十篇国外期学术论文及专利援用了咱们的就业，且其数目正逐年递加。咱们古道迎接您的到来！

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